Karrol 伴侣（氯仿替代试剂）

Karrol Mate Karrol 伴侣（氯仿替代试剂）
安全警告
有毒物接触皮肤或者不慎吞服会导致灼伤。一旦接触皮肤后立即以大量的洗涤剂和清水清洗。若感不适， 看医生并寻求苯酚和其他成分的正确治疗方案。

主要用途
主要用于 RNA 提取试剂操作过程中的氯仿替代。适合 Karrol 但不限于其它 RNA 提取试剂配套使用。

操作步骤
1. 细胞或组织匀浆液加 Karrol 后，室温放置 5min，使其充分裂解。注：此时可放入-70℃长期保持。
2. 按 200 μl 氯仿/ml Karrol 加入氯仿（或按 400 μl Karrol mate/ml Karrol 加入 Karrol mate），振荡混匀后室温放置 5-15min。注：禁用漩涡振器，以免基因组 DNA 断裂。对于脂肪组织，加入 400 μl 氯仿/ml Karrol（或 加入 800 μl Karrol mate/ml Karrol）。 （注：此步骤为 Karrol mate 替代氯仿步骤，其它步骤同正常提取步骤。）
3. 4℃，12000g 离心 15 min 4. 吸取上层水相，至另一离心管中。注：千万不要吸取中间界面；若同时提取 DNA 和蛋白质，则保留下 层酚相于 4℃冰箱。
5. 按 0.5ml 异丙醇/ml Karrol 加入异丙醇混匀（异丙醇体积与水相体积相当），室温放置 1-5min。
6. 4℃ 12000g 离心 10min，弃上清，RNA 沉于管底。
7. 按 1ml 75%乙醇/ml Karrol 加入 75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。
8. 4℃ 8000g 离心 5min，尽量弃上清。
9. 室温晾干或真空干燥 1-5min，注：RNA 样品不要过于干燥，否则很难溶解。
10. 可用 50-100 μl RNase-free 的 H2O 或 TE buffer 溶解 RNA 样品。
11. （可选）测 OD 值定量 RNA 浓度。注：此方法提取 RNA A260/A280 值在 1.6-1.8 之间（TE 中会高 些）；产率估计：组织样本：（μg RNA/mg 组织）1-10 μg，培养细胞（μg RNA / 106 Cell）：5-15 μg。
12. RNA 应尽快做下游实验。