原代细胞的培养方法

原代细胞最接近和最能反映体内生长特性，适宜用于药物敏感性试验、细胞分化等实验研究。
　　原代细胞的培养，也叫初代培养，是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养，是建立细胞系的第一步，是一项基本技术。
原代细胞的培养方法一般有以下4种：
① 组织块培养法
　　组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。
② 消化培养法
③ 悬浮细胞培养法
　　对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。
④器官培养
　　器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。
原代细胞的培养条件：
一、静置贴壁细胞(包括半贴壁细胞的培养)培养
1、细胞要通过充分漂洗，以尽量除去消化液的毒性；
2、细胞接种时浓度要稍大一些，至少为5×108细胞/L；
3、培养基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培养；
4、 胎牛血清浓度为10%-80%；
5、应在37℃5% CO2的培养箱中培养；
6、在起始的2天中尽量减少振荡，以防止刚贴壁的细胞发生脱落，漂浮；
7、待细胞基本贴壁伸展并逐渐形成网状，应将原代细胞换液；
8、用骨髓或外周血中的悬浮细胞经静置培养1周时，应将细胞悬液经低速离心后换液。
　　二、悬浮细胞培养
1、原代培养时要尽量去除红细胞；
2、短期培养，可在含10%小牛血清的RPMI1640培养基中进行；
3、细胞浓度可在4-6X105/ml范围内，进行分瓶试验；
4、长期培养时，淋巴细胞中要加入生长因子，白血病细胞中要加入少量的原患者血清，以利细胞生长；
5、细胞换液一般每隔3天需半量换液一次；
6、细胞传代一般待细胞增殖加快、细胞密度较高时才能进行。